液相色譜柱的分類方法很多,可按鍵合相類型、用途(分析型與制備型)、基質(zhì)種類等進行分類。今天就讓我們一起來了解一下吧。
一、硅膠基質(zhì)柱(4大類)
目前,分析型液相色譜柱多為硅膠基質(zhì)柱,細分為:
1、高純硅膠柱:以高純度硅烷化硅膠(Silica)為填料,應(yīng)用范圍較廣,但只能在PH2.0-7.5,小于60度的條件下使用。又由于強極性硅羥基(Si-OH)的次級保留效應(yīng)較強,所以應(yīng)用受到局限,已被鍵合相柱所取代。
2、反相硅膠柱:是以硅烷化硅膠為基質(zhì),表面鍵合弱極性官能團的固定相。目前多用C18(ODS)、C8(MOS)、C4(B)、C6H5(phenyl,苯基)等。用于分離大多數(shù)有機化合物,應(yīng)用范圍*。
3、正相硅膠柱:是以硅烷化硅膠為基質(zhì),表面鍵合極性官能團的固定相。目前較多的為:NH2-(氨基)、CN-(氰基)、DIOL(二羥基,也常做HILIC單獨分類列出,多用于分離有機酸、蛋白質(zhì)等)。多用于分離光學(xué)異構(gòu)體和反相柱子不能分離的極性比較大的物質(zhì)。
4、離子交換柱:是以硅烷化硅膠為基質(zhì),以磺化交聯(lián)鍵合強陽/陰離子基團(磺酸鹽/季銨堿)的固定相,又分為強酸性、強堿性、弱酸性、弱堿性等不同規(guī)格。用于分離解離性較強的有機鹽類化合物。(注意:不要同離子色譜混淆,離子色譜主要是分離無機鹽類化合物或某些帶點離子。)
二、聚合物基質(zhì)柱
聚合物基質(zhì)柱是指采用聚苯乙烯-二乙烯基苯、聚甲基丙烯酸脂、多孔性微球蛋白等聚合物凝膠作為主要填料的一類色譜柱。其相對于硅膠柱具有更強的疏水性及更寬泛的pH范圍(1.0~14.0),但柱效較低,目前主要應(yīng)用于凝膠滲透色譜(GPC)、凝膠過濾色譜(GFC)及分子排阻色譜(MEC)。主要用于分離蛋白質(zhì)類等大分子化合物。
三、其他無機物填料柱
這類色譜柱僅限于特殊用途,主要有石墨化碳、氧化鋁(Al2O3)、氧化鋯(ZrO2)等填料。不需要進行表面改性,其自身表面即可對各類化合物有強保留??稍谌我鈖H(氧化鋁除外,不能大于12.0)及高溫度(可達100℃)下使用。其中,石墨化碳填料柱能分離多種化合物,主要用于分離幾何異構(gòu)體;氧化鋁柱剛性強,柱床穩(wěn)定,可分離多種化合物且多用于制備色譜;氧化鋯柱較氧化鋁柱有更強的pH適用范圍及能耐受更高的溫度,但其應(yīng)用尚待進一步研究。
四、建立色譜柱檔案
應(yīng)同色譜儀器檔案一樣重視色譜柱檔案,主要內(nèi)容包括:品牌、型號、系列號、購進日期、購進發(fā)票、使用記錄(使用日期、使用人、使用目的、使用情況)、維護保養(yǎng)記錄(老化時間、老化人、故障現(xiàn)象、故障原因、處理方法、處理結(jié)果及附圖)等,并以檔案盒形式保存,最好做到專柱專用